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DNA的粗提取

①準(zhǔn)備材料 將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24 h。

②取材 稱取30 g菜花,去梗取花,切碎。

③研磨 將碎菜花放入研缽中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min 。

④過濾 在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液濾入燒杯中(有條件的學(xué)?？蓪V液倒入塑料離心管中進(jìn)行離心,用1 000r/min的旋轉(zhuǎn)頻率,離心25 min,取上清液放入燒杯中)。在4 ℃冰箱中放置幾分后,再取上清液。

⑤加冷酒精 將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液(玻璃棒不要直插燒杯底部)。沉淀35 min后,可見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn),絮狀物會纏在玻璃棒上。

(2)DNA的鑒定

①配制二苯胺試劑 取0.1 mL B液,滴入到10 mL A液中,混勻。

②鑒定 取4 mL DNA提取液放入試管中,加入4 mL 二苯胺試劑,混勻后觀察溶液顏色(不變藍(lán))。用沸水浴(100 ℃)加熱10 min 。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現(xiàn)淺藍(lán)色)。

研磨液的配制方法

Tris：10.1 g(相對分子質(zhì)量為121.14),先加50 mL 蒸餾水溶解,用物質(zhì)的量濃度為2 moL/L 的鹽酸調(diào)至pH8.0,再加下述藥品。

NaCl：8.76 g(相對分子質(zhì)量58.44)

EDTA：37.2 g(相對分子質(zhì)量372.24)

SDS：20 g(相對分子質(zhì)量288.3)

待上述藥品全部溶解后,再用蒸餾水定容至1 000 mL。

若在室溫低于20 ℃時配制藥液,SDS呈沉淀析出,此時需要加溫,才能將SDS溶解。如果提前配制的研磨液出現(xiàn)了沉淀,則應(yīng)加溫使沉淀溶解后再使用。

研磨液中幾種藥品的作用

SDS(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質(zhì)變性,與DNA分離。

EDTA(乙二胺四乙酸二鈉):為DNA酶的抑制劑,可以防止細(xì)胞破碎后DNA酶降解DNA。

物質(zhì)的量濃度為0.15 moL/L的氯化鈉溶液：能很好地溶解DNA。

Tris/HCl：提供緩沖體系,DNA在這個緩沖體系中呈穩(wěn)定狀態(tài)。(Tris為三羥甲基氨基甲烷)

鑒定DNA的其他方法 用紫外燈照射法鑒定DNA效果很好。具體鑒定方法如下。

1.配制染色劑。用蒸餾水配制萬分之五的溴化乙錠(EB)溶液。

2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹于蠟紙上,再滴1滴EB溶液染色。

3.將蠟紙放在紫外燈(260 nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的螢光(DNA的紫外吸收高峰在280 nm處)。

本文到此講解完畢了，希望對大家有幫助。