大家好，我是小夏，我來(lái)為大家解答以上問(wèn)題。dna聚合酶的作用部位，dna聚合酶很多人還不知道，現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！

DNA聚合酶的種類很多，它們?cè)诩?xì)胞中的DNA復(fù)制過(guò)程中起著重要的作用。DNA聚合酶有DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三類?；蚬こ讨泻芏嗖襟E都需要DNA聚合酶催化DNA體外合成反應(yīng)，這些酶作用時(shí)大多都需要模板，合成產(chǎn)物的序列與模板互補(bǔ)。基因工程常用的DNA聚合酶有：①大腸桿菌聚合酶Ⅰ(全酶)；②大腸桿菌聚合酶Ⅰ大片段(Klenow片段)；③T4噬菌體DNA聚合酶；④T7噬菌體聚合酶及經(jīng)修飾的T7噬菌體聚合酶(測(cè)序酶)，⑤耐熱DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)；⑥末端轉(zhuǎn)移酶(末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶，也屬DNA聚合酶)；⑦逆轉(zhuǎn)錄酶(依賴于RNA的DNA聚合酶)。

DNA聚合酶Ⅰ是基因工程中最常用的工具酶。DNA聚合酶Ⅱ是一條120kD的肽鏈，催化5′→3′方向合成DNA，也具有3′→5′外切酶活性但沒(méi)有5′→3′外切酶活性?？赡茉诋?dāng)細(xì)胞DNA受到化學(xué)或物理?yè)p傷時(shí)，DNA聚合酶Ⅱ在修復(fù)過(guò)程中起特殊作用。DNA聚合酶Ⅲ全酶是一種大于250kD，由多種亞基組成的蛋白質(zhì)，它是不對(duì)稱的二聚體，兩個(gè)亞基可分別同時(shí)催化前導(dǎo)鏈(leadingstrand)及后隨鏈的合成。DNA聚合Ⅲ與DNA聚合酶Ⅰ相同，也具有3′→5′外切酶活性。在DNA聚合作用中，核苷酸添加的錯(cuò)誤率達(dá)1/1000。由于DNA聚合酶Ⅰ和DNA聚合酶Ⅲ全酶的3′→5′外切酶活性，可以終止核苷酸加入并除去錯(cuò)誤核苷酸，然后可繼續(xù)加入正確的核苷酸，可將錯(cuò)誤率減少到百萬(wàn)分之一或更少。

大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ(全酶)：DNA聚合酶Ⅰ的分子量為109kD，是一條約1000個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈。它具有三種活性：①5′→3′DNA聚合酶活性(能以單鏈DNA為模板，在3′-OH引物的引導(dǎo)下，按5′→3′方向，合成互補(bǔ)的DNA序列)，②3′→5′外切核酸酶活性(能夠去除延長(zhǎng)的核酸鏈上的3′-OH末端上的核苷酸，可以沿3′→5′方向降解雙鏈或單DNA鏈DNA，釋放5′-單核苷酸)，③5′→3′外切核酸酶活性(能從DNA鏈5′-OH末端降解雙螺旋DNA的一條鏈，沿5′→3′方向，釋放出單核苷酸或寡核苷酸)。DNA聚合酶Ⅰ的主要用途：①用切口平移方法標(biāo)記DNA(可作雜交探針)，②利用其5′→3′外切核酸酶活性降解寡核苷酸作為合成cDNA第二鏈的引物，③用于對(duì)DNA分子的3′突出尾進(jìn)行末端標(biāo)記，用于DNA序列分析。

大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ大片斷(KLENOW)：KLENOW片斷是用枯草桿菌蛋白酶裂解完整的DNA聚合酶Ⅰ產(chǎn)生，或通過(guò)克隆技術(shù)而獲得。此酶是單一多肽鏈，分子量76kD。它具有5′→3′聚合酶活性和3′→5′外切酶活性，而無(wú)5′→3′外切酶活性。Klenow片段的主要用途：①補(bǔ)平限制性內(nèi)切酶切割DNA產(chǎn)生的3′凹端；②用［32P］dBTP補(bǔ)平3′凹端，對(duì)DNA片段進(jìn)行末端標(biāo)記；③對(duì)帶3′突出端的DNA進(jìn)行末端標(biāo)記；④在cDNA克隆中，用于合成cDNA第二鏈；⑤在體外誘變中，用于從單鏈模板合成雙鏈DNA；⑥應(yīng)用雙脫氧鏈末端終止法進(jìn)行DNA測(cè)序。

T4噬菌體DNA聚合酶：T4噬菌體DNA聚合酶(分子為114kD)，與Klenow片斷相似的是：都具有5′→3′聚合酶活性及3′→5′外切核酸酶活性。其3′→5′外切酶活性對(duì)單鏈DNA的作用比對(duì)雙鏈DNA的作用更強(qiáng)。它的外切核酸酶活性比Klenow片段要強(qiáng)200倍。由于它不從單鏈DNA模板上置換寡核酸引物，因此在體外誘變反應(yīng)中，它的效率比Klenow片段更強(qiáng)。它的主要用途：①補(bǔ)平或標(biāo)記限制性內(nèi)切酶消化DNA后產(chǎn)生的3′凹端，②對(duì)帶有3′突出端的DNA分子進(jìn)行末端標(biāo)記；③標(biāo)記用作探針的DNA片段。④將雙鏈DNA的末端轉(zhuǎn)化成為平端。⑤使結(jié)合于單鏈DNA模板上的誘變寡核苷酸引物得到延伸。

Ts噬菌體DNA聚合酶及由此改造的測(cè)序酶：T7噬菌體感染大腸桿菌誘生的DNA聚合酶，是兩種緊密結(jié)合的蛋白質(zhì)的復(fù)合體。這兩種蛋白質(zhì)一種是T7噬菌體基因5蛋白，另一種是宿主蛋白的硫氧還原蛋白。該酶是所有已知DNA聚合酶中持續(xù)合成能力最強(qiáng)的一個(gè)，它所催化合成的DNA的平均長(zhǎng)度要比其他DNA聚合酶催化合成的DNA平均長(zhǎng)度大得多。它的3′→5′外切核酸酶活性約為Klenow片段的1000倍。它沒(méi)有5′→3′外切酶核酸酸活性。它的主要用途：①用于拷貝長(zhǎng)段模板的引物延伸反應(yīng)，②通過(guò)補(bǔ)平或交換(置換)反應(yīng)進(jìn)行快速末端標(biāo)記。

T7噬菌體聚合酶中基因5蛋白中一個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū)，與大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的DNA結(jié)合處及聚合結(jié)構(gòu)區(qū)高度同源。這一結(jié)合及聚合結(jié)構(gòu)區(qū)包含了該蛋白近羥基端的序列，而其氨其端則具有強(qiáng)有力的3′→5′外切核酸活性。用氧作還原劑把該酶分子與氧及二價(jià)鐵離子處理可使酶3′→5′外切核酸酶活性滅活而保留其聚合酶活性。改造后的酶的持續(xù)合成能力很強(qiáng)，是雙脫氧鏈終止法對(duì)長(zhǎng)段DNA進(jìn)行測(cè)序的理想用酶。后來(lái)由UnitedStatesBiochemical公司以測(cè)序酶(sequenase)作為商品名投放市場(chǎng)，現(xiàn)在已通過(guò)基因工程手段生產(chǎn)出一種改進(jìn)的測(cè)序酶(2.0版)，它完全喪失了外切核酸酶活性。

耐熱DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)：這是一種耐熱的依賴DNA的DNA聚合酶(分子量65kD，原是從嗜熱的水生菌Thermusaquaticus中純化來(lái)的，現(xiàn)在以基因工程生產(chǎn)并出售(AmpliTaqTM)。這些酶具有依賴于聚合物5′→3′外切核酸酶活性。用途：①用于DNA測(cè)序，②用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)對(duì)DNA片段進(jìn)行體外擴(kuò)增。

末端轉(zhuǎn)移酶：從動(dòng)物胸腺和骨髓中提取。此酶催化脫氧核苷酸添加到DNA分別的3′-OH末端上，催化作用不要求有模板，但需Co2+的存在。末端轉(zhuǎn)移酶可作一群DNA分子的3′-OH末端接上寡dA或dC，而給另一群DNA分子的3′-OH末端接上寡dT或dG，混合這兩群分子，即可使同聚物尾部退火形成環(huán)狀分子。用途：①給載體或cDNA加上互補(bǔ)的同聚尾，②用于DNA片段3′末端的放射同位素標(biāo)記。

本文到此講解完畢了，希望對(duì)大家有幫助。